Таблица 6 – Число колоний на МПА при температуре 37°С
Для расчета концентрации ОМЧ при температуре 37°С используется формула 1.
X (ОМЧ, 37°С) = = 110,81 КОЕ/мл
Рисунок 18 – Цельная проба Рисунок 19 – Концентрация 10 -1
Рисунок 20 – Концентрация 10 -2
При температуре 37°С на чашках выросли колонии трех типов:
1 тип: крупные колонии, есть точечные и мелкие; форма колоний
– круглая; профиль колоний – выпуклый; край колоний – гладкий; структура колоний – однородная; консистенция колоний – мягкая; поверхность колоний – влажная, гладкая, блестящая с глянцем; прозрачность колоний
– непрозрачные; цвет колоний – молочно-белый. Окраска по Граму выявила грамотрицательные короткие палочки.
2 тип: колонии средние; форма колоний – круглая; профиль колоний – выпуклый; край колоний – гладкий; структура колоний – однородная; консистенция колоний – мягкая; поверхность колоний – влажная, гладкая, блестящая с глянцем; прозрачность колоний – мутные; цвет колоний
– оранжевые. Окраска по Граму выявила грамположительные длинные палочки.
3 тип: форма колоний – круглая; профиль колоний – врастающий в субстрат; структура колоний – однородная; прозрачность колоний – прозрачные; цвет колоний – молочно-белый. Окраска по Граму выявила грамположительные короткие палочки.
Рисунок 21 – препарат 1 типа
Рисунок 23 – препарат 3 типа колоний
Таблица 7 – Число колоний на МПА при температуре 22°С
Для расчета концентрации ОМЧ при температуре 22°С используется формула 1.
X (ОМЧ, 22°С) = = 130,63 КОЕ/мл
где Y – соотношение ОМЧ при температуре 22°С и ОМЧ при температуре 37°С, [КОЕ/мл]
Y = КОЕ/мл
Рисунок 24 – Цельная проба Рисунок 25 – Концентрация 10 -1
Рисунок 26 – Концентрация 10 -2
При температуре 22°С на чашках выросли колонии трех типов:
1 тип: крупные колонии, есть точечные; форма колоний
– неправильная; профиль колоний – изогнутый; край колоний – гладкий; структура колоний – однородная; консистенция колоний – мягкая; поверхность колоний – влажная, гладкая, блестящая с глянцем; прозрачность колоний – мутные; цвет колоний – кремовый. Окраска по Граму выявила грамотрицательные короткие палочки.
2 тип: крупные колонии; форма колоний – круглая; профиль колоний – плоский; край колоний – неправильный; структура колоний – неоднородная; консистенция колоний – мягкая; поверхность колоний – влажная, шероховатая, блестящая с глянцем; прозрачность колоний – непрозрачные; цвет колоний – молочно-белый. Окраска по Граму выявила грамотрицательные короткие палочки.
3 тип: крупные колонии; форма колоний – круглая; профиль колоний – изогнутый; край колоний – гладкий; структура колоний – однородная; консистенция колоний – мягкая; поверхность колоний – влажная, гладкая, блестящая с глянцем; прозрачность колоний – непрозрачные; цвет колоний – молочно-белый. Окраска по Граму выявила грамотрицательные короткие палочки.
Рисунок 27 – препарат 1 типа
Рисунок 29 – препарат 3 типа колоний
Таблица 8 – Сравнительная характеристика полученных показателей с требованиями к составу и свойствам воды водных объектов рекреационного водопользования
| № | Показатели | Полученные данные | Норма для рекреационного водопользования |
| Плавающие примеси | Отсутствуют | На поверхности воды не должны обнаруживаться пленки нефтепродуктов, масел, жиров и скопление других примесей | |
| Запахи | Интенсивность слабая (2 балла) | Вода не должна приобретать запахи интенсивностью более 2 баллов, обнаруживаемые непосредственно | |
| Водородный показатель (рН) | 8,2 ед. рН | Не должен выходить за пределы (6,5-8,5) ед. рН | |
| Общие колиформные бактерии (ОКБ) | 3200 КОЕ/100мл | Не более 500 КОЕ/100 мл | |
| Общее микробное число (ОМЧ) при 22°С | 130,63 КОЕ/мл. | Не нормируется | |
| Общее микробное число (ОМЧ) при 37°С | 110,81 КОЕ/мл | ||
| Соотношение ОМЧ (22°С):ОМЧ (37°С) | 1,2 КОЕ/мл | Более 4 КОЕ/мл |
Выводы:
I. Изучили физико-химические показатели пробы воды из пруда в Боровиках города Кирова:
1. Характер запаха пробы воды землистый. При температуре 22°С интенсивность запаха слабая, а при 60°С – заметная. Интенсивность запаха соответствует норме.
2. Показатель pH пробы воды составил 8,2 ед. pH, следовательно, среда слабощелочная, соответствует норме.
3. Плавающих примесей в пробе воды не обнаружено.
II. Определили микробиологические показатели исследуемой пробы воды:
1. Концентрация общих колиформных бактерий (ОКБ) составила 32 КОЕ/мл. Что превышает норму для рекреационного водопользования в 6,5 раз.
2. При определении термотолерантных колиформных бактерий (ТКБ) при температуре 37°С колонии выросли из всех разведений, окраска мазков по Граму выявила грамотрицательные короткие палочки во всех разведениях. При температуре 44°С колонии выросли только из разведения с концентрацией 10 -3 , окраска мазков по Граму выявила грамотрицательные длинные палочки.
3. Оксидазный тест положительный у культуры с концентрацией 0,09, выросшей при температуре 37°С. У остальных культур оксидазный тест отрицательный.
4. При 37°С на чашках с МПА выросло 3 типа колоний. Окраска по Граму выявила грамотрицательные и грамположительные палочки.
5. Общее микробное число (ОМЧ) при 37°С составило 110,81 КОЕ/мл.
6. При 22°С на чашках с МПА выросло 3 типа колоний. Окраска по Граму выявила грамотрицательные палочки.
7. Общее микробное число (ОМЧ) при 22°С составило 130,63 КОЕ/мл.
8. Соотношение ОМЧ при температуре 22°С к ОМЧ при температуре 37°С составило 1,2 КОЕ/мл. Следовательно, водоем не способен к самоочищению.
Общее микробное число
Общее микробное число отражает общий уровень содержания бактерий в воде, а не только тех из них, которые образуют колонии, видимые невооруженным глазом на питательных средах при определенных условиях культивирования. Эти данные не имеют большого значения для обнаружения фекального загрязнения и не должны считаться важным показателем при оценке безопасности систем питьевого водоснабжения, хотя внезапное увеличение числа колоний при анализе воды из подземного водоисточника может служить ранним сигналом загрязнения водоносного горизонта.
Общее микробное число полезно при оценке эффективности процессов водоочистки, особенно коагуляции, фильтрации и обеззараживания, при этом основная задача заключается в поддержании их количества в воде на возможно более низком уровне. Общее микробное число может быть использовано также для оценки незагрязненности и целостности распределительной сети и пригодности воды для производства пищевых продуктов и напитков, где число микроорганизмов должно быть низким для сведения до минимума риска порчи. Ценность данного метода заключается в возможности сравнения результатов при исследовании регулярно отбираемых проб из одной и той же системы водоснабжения для обнаружения отклонений.
Общее микробное число, т. е. число колоний бактерий в 1 мл питьевой воды, не должно быть более 50.
Вирусологические показатели качества воды
К вирусам, вызывающим особое беспокойство в связи с передачей водным путем инфекционных заболеваний, относятся главным образом те, которые размножаются в кишечнике и в больших количествах (десятки миллиардов на 1 г кала) выделяются с фекалиями зараженных людей. Хотя репликации вирусов вне организма не происходит, энтеровирусы обладают способностью к выживанию во внешней среде в течение нескольких дней и месяцев. Особенно много энтеровирусов в сточных водах. При водозаборе на водоочистных сооружениях в воде обнаруживают до 43 вирусных частиц на 1 л.
Высокая выживаемость вирусов в воде и незначительная заражающая доза для человека приводят к эпидемическим вспышкам вирусного гепатита и гастроэнтерита, но через источники водоснабжения, а не питьевую воду. Однако потенциально такая возможность сохраняется.
Вопрос о количественной оценке допустимого содержания вирусов в воде очень сложен. Сложно и определение вирусов в воде, особенно питьевой, так как возможен риск случайного загрязнения воды при отборе проб. В Российской Федерации согласно СанПиНу оценку вирусного загрязнения (определение содержания колифагов) проводят по подсчету числа бляшкообразующих единиц, создаваемых колифагом. Прямое определение вирусов очень сложно. Колифаги присутствуют совместно с кишечными вирусами. Количество фагов обычно больше, чем вирусных частиц. По своей величине колифаги и вирусы очень близки, что важно для процесса фильтрации. Согласно СанПиНу в 100 мл пробы бляшкообразующих единиц быть не должно.
Простейшие
Из всех известных простейших патогенными для человека, передающимися через воду, могут быть возбудители амебиаза (амебной дизентерии), лямблиоза и балантидиаза (инфузории). Однако через питьевую воду возникновение данных инфекций происходит редко, лишь при попадании в нее сточных вод. Наиболее опасен человек, являющийся источником-носителем резервуара цист лямблий. Попадая в сточные и питьевые воды, а затем опять в организм человека, они могут вызвать лямблиоз, протекающий с хроническими диареями. Возможен смертельный исход.
По принятому нормативу цист лямблий в питьевой воде объемом 50 л наблюдаться не должно.
Должны отсутствовать в питьевой воде и гельминты, а также их яйца и личинки.
В отношении воды из источников естественного происхождения различают микроорганизмы - сапробионты и катаробионты, которые рассматриваются в качестве показателя микробиологического загрязнения водоемов. К группе катаробионтов (катаробов) относятся микроорганизмы, живущие только в чистой ключевой воде. Группу сапробионтов (сапробов) составляет микрофлора всех остальных пресных водоемов.
Сапробностью называют определенные физиологические особенности конкретного вида микроорганизмов, определяющие их способность к жизнедеятельности в водной среде, загрязненной соединениями органики. Индексы сапробности для водных объектов вычисляют на основе индивидуальной видовой сапробности организмов, составляющих комплекс их микрофлоры.
В представленной ниже таблице отражена зависимость класса чистоты и уровня загрязненности природных водоемов от микробиологических показателей их воды.
Таблица 1
Показатели микробиологического загрязнения применимы ко многим промышленным отраслям. Требования к чистоте водоемов регламентируются ГОСТами, ТУ (тех. условиями), другой нормативной документацией и имеют существенные отличия в отношении различных объектов. Например, эксплуатация бассейна невозможна без разработки программы производственного контроля. Она должна пройти согласование с главврачом Госсанэпиднадзора данной административной территориальной единицы и получить разрешение от руководства организации, собирающейся эксплуатировать данный плавательный объект.
Таблица 2
Таблица 3
Уважаемые господа, если у Вас возникла потребность коррекции показателей микробиологического загрязнения в природной или технической воде, сделайте запрос специалистам компании Waterman
. Мы разработаем оптимальную схему обеззараживания воды.
|
При анализе воды надо контролировать не только содержание токсичных химических веществ, но и количество микроорганизмов, характеризующих бактериологическое загрязнение питьевой воды ОМЧ-общее микробное число.В воде централизованного водоснабжения это число не должно превышать 50 КОЕ/мл, а в колодцах, скважинах - не более 100 КОЕ/мл
Санитарно-микробиологическос исследование воды проводится в плановом
порядке с целью текущего надзора, а также по специальным эпидемиологичес-
ким показаниям. Основными объектами такого исследования являются:
Питьевая вода центрального водоснабжения (водопроводная вода);
Питьевая вода нецентрализованного водоснабжения;
Вода поверхностных и подземных водоисточников;
Сточные воды;
Вода прибрежных зон морей;
Вода плавательных бассейнов.
Основными показателями оценки микробиологического состояния питьевой воды согласно действующим нормативным документам являются:
1. Общее микробное число (ОМЧ) - количество мезофильных бактерий в 1 мл волы.
Коли титр
- наименьший объем воды (в мл), в котором обнаружена хотя бы одна живая
микробная клетка, относящаяся к БГКП.
Индекс БГКП
- количество БГКП в 1 л воды.
3. Количество спор сульфитредуцирующих клостридий в 20 мл воды.
4. Число колифагов в 100 мл воды.
Определение ОМЧ позволяет оценить уровень микробиологического загрязнения питьевой воды. Этот показатель является незаменимым для срочного обнаружения массивного микробного загрязнения.
Общее микробное число - это число мезофильных аэробных и факультативно анаэробных микроорганизмов, способных образовывать на питательном агаре при гемперазуре 37 °С и течение 24 ч колонии, видимые при двукратном увеличении.
При определении общего микробного числа 1мл исследуемой воды вносят в стерильную чашку Петри и заливают 10-12 мл теплого (44 °С) расплавленного питательного агара. Среду аккуратно перемешивают с водой, равномерно и
без пузырьков воздуха распределяя по дну чашки, после чего закрывают крышкой и оставляют до застывания. Посевы инкубируют в термостате при 37 °С в течение 24 часов. Подсчитывают общее количество колоний, выросших в обеих чашках, и определяют среднее значение. Окончательный результат выражают числом колониеобразующих единиц (КОЕ) в 1 мл исследуемой воды. В 1 мл питьевой воды должно быть не более 50 КОЕ
Определение БГКП
При этом определяют общие колиформные бактерии - ОКБ и термотолерантные колиформные бактерии - ТКБ.
ОКБ – грамамотрицатсльные, не образующие спор палочки, ферментирующие лактозу до кислоты и газа при температуре 37°С в течение 24 48 часов. ТКБ входят в число ОКБ, облажают их признаками, но ферментирую при 44°С.Для определения энтеробактерий – метод мебранных фильтров или титрационный.
Микробное число - основными критериями оценки микробиологического состояния питьевой воды, исходя из действующих нормативных документов, является ОМЧ (общее микробное число), которое характеризует количество аэробных и анаэробных бактерий в одном миллилитре воды, образующихся за сутки при температуре 37 градусов, в питательной среде. Данный показатель является фактически незаменимым для быстрого обнаружения массового микробного загрязнения.
Для определения общего микробного числа один миллилитр исследуемой воды вносят в стерильную чашку Петри, затем заливают 10-15 мл тёплого (около 44 °С) питательного агара в расплавленном виде. Среду аккуратно смешивают с водой, равномерно и без воздушных пузырьков воздуха распределяют по дну чашки, после этого закрывают крышкой и оставляют в чашке Петри до застывания. Тоже самое проделывают в другой чашке. Посев в термостате инкубируют при температуре 37 °С в течение суток. Затем при двукратном увеличении под микроскопом подсчитывают общее количество колоний, выросших в двух чашках, и определяют среднее значение. В 1 мл питьевой воды не должно быть более 50 КОЕ.
Цель работы : определить микробное число водопроводной воды.
Микробное число дает представление об общей обсемененности воды аэробными сапрофитами, которые составляют только часть общего числа микробов в воде. Однако существует прямая зависимость между величиной микробного числа и вероятностью присутствия в воде патогенных микроорганизмов.
Микробное число водопроводной воды не должно превышать 50 колоний бактерий в 1 мл. Его определяют методом посева на питательную среду – мясопептонный агар (МПА). Метод заключается в том, что в 1 мл воды определяют бактерии, которые способны расти на питательном агаре при температуре 37 0 С в течение 24 ч, образуя колонии, видимые при увеличении в 2 – 5 раз. Проведенным таким образом анализом нельзя определить полностью все бактерии в воде, а только те, которые развиваются в условиях анализа. Поэтому, определение дает не абсолютную, а относительную бактериологическую характеристику воды. Этим методом можно сравнивать бактериальную зараженность разных мест источника воды, а также одного места в разные времена года.
Приборы и оборудование
Термостат; микроскоп; чашки Петри; питательная среда МПА; дистиллированная вода.
Материалы: вода водоема и водопроводная вода.
Выполнение работы
В чашку Петри пипеткой вносят 1 мл исследуемой питьевой воды (если исследуют сточную воду, ее разбавляют стерильной водой в несколько раз) , затем заливают пробу 10 – 12 мл остуженного питательного мясопептонного агара (МПА), имеющего температуру приблизительно 45 0 С. Содержимое быстро перемешивают, осторожно наклоняя и вращая чашку по поверхности стола. Необходимо избегать образования пузырьков воздуха, незаметных частей дна чашки, попадания среды на края и крышку чашки. После застывания среды чашку помещают в термостат и выдерживают при температуре 37 0 С в течение 24 часов. За это время в чашке Петри вырастают колонии, которые видны при увеличении в 2 – 5 раз. Обычно вырастает от 30 до 300 колоний.
Для подсчета числа колоний чашку кладут вверх дном на черный фон. Для ускорения подсчета числа колоний Х определяют число колоний в 1 см 2 и умножают это число на площадь чашки
S = π r
где r – радиус чашки.
Х = nS
где n – число колоний.
По полученным данным определяют степень загрязнения воды.
Таблица Степень загрязнения воды в зависимости от общего числа бактерий
|
Характеристика воды |
Число бактерий в 1 мл |
|
очень чистая умеренно загрязненная загрязненная очень грязная |
|
|
ПРИМЕЧАНИЕ : a имеет значения от 1 до 9. |
|
